bmgrp BI-VAN1MR說明書

Vanin-1 ELISA Kit (Mouse/Rat VNN1) | BI-VAN1MR

Vanin-1 ELISA試劑盒（小鼠/大鼠VNN1）

Biomedica大鼠和小鼠Vanin1 ELISA試劑盒：

• 針對臨床前樣品進行了優(yōu)化
• 低樣品量≤5µl
• 提供參考值

• 1個

分析特征

• 方法

  夾心ELISA，HRP / TMB，12×8孔可分離試紙

• 樣品類型

  血清，血漿和尿液

• 樣品量

  5微升/孔

• 測定時間

  4小時/ 30分鐘

• 靈敏度

  2.31 pmol /升

• 標(biāo)準(zhǔn)范圍

  0 – 200 pmol / l（= 0 – 10.6 ng / ml）

• 轉(zhuǎn)換系數(shù)

  1 pmol / l = 52.07 pg / ml（MW：52.07 kDa）

•  

  中間運行（n = 5）：≤8％CV

  批量分析（n = 7）：≤8％CV

• 特異性

  內(nèi)源和重組小鼠/大鼠Vanin-1。

• 采用

  僅供研究使用。

• 驗證數(shù)據(jù)

  請參閱驗證數(shù)據(jù)選項卡，以了解：精度，準(zhǔn)確性，稀釋線性，樣品值

•  

小鼠/大鼠Vanin-1 ELISA產(chǎn)品概述

Vanin-1 ELISA試劑盒是一個4.5小時的96孔夾心ELISA，用于定量測定血清，血漿和尿液中的Vanin-1。

小鼠/大鼠Vanin-1 ELISA測定原理

Vanin-1小鼠/大鼠ELISA試劑盒是一種夾心酶免疫測定法，用于定量測定小鼠或大鼠樣品中的Vanin-1。該試劑盒利用重組小鼠Vanin-1作為校準(zhǔn)物。VNN1基因在黑猩猩，恒河猴，狗，牛，小鼠，大鼠和雞中是保守的https://www.ncbi.nlm.nih.gov/homologene/32130。

下圖說明了Vanin-1夾心ELISA的原理：

靶抗原： 小鼠/大鼠Vanin-1
靶抗原：重組小鼠Vanin-1

一步，將測定緩沖液吸移到微量滴定條的孔中。此后，將標(biāo)準(zhǔn)/對照/樣品和檢測抗體（多克隆綿羊抗小鼠Vanin-1-HRPO）移入孔中，并預(yù)先涂有抗小鼠Vanin-1抗體。存在于標(biāo)準(zhǔn)品/對照品/樣品中的Vanin-1與孔中預(yù)包被的抗體結(jié)合，并與檢測抗體形成三明治。在洗滌步驟中，將除去所有非特異性未結(jié)合的材料。在下一步中，將底物（TMB，四甲基聯(lián)苯胺）移入孔中。底物的酶催化顏色變化與樣品中Vanin-1的量成正比。使用標(biāo)準(zhǔn)酶標(biāo)儀可以檢測到這種顏色變化。吸光度的劑量響應(yīng)曲線（光密度，使用從標(biāo)準(zhǔn)品獲得的值，生成相對于標(biāo)準(zhǔn)品濃度的450 nm處的OD。直接從劑量響應(yīng)曲線確定樣品中Vanin-1的濃度。

小鼠/大鼠Vanin-1 ELISA典型標(biāo)準(zhǔn)曲線

下圖顯示了Mouse Vanin-1 ELISA和Rat Vanin-1 ELISA的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線。Vanin ELISA試劑盒針對重組小鼠Vanin-1肽進行了校準(zhǔn)：

小鼠/大鼠Vanin-1 ELISA試劑盒組件

儲存說明： Vanin-1 Mouse / Rat ELISA試劑盒中的所有試劑在4°C穩(wěn)定，直到每種試劑標(biāo)簽上注明的有效期。

樣品收集與儲存

血清，血漿和尿液樣本適用于此Vanin-1 ELISA分析。研究期間請勿更改樣品類型。我們建議對所有樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品進行重復(fù)測量。列出的所列樣品收集和儲存條件旨在作為一般準(zhǔn)則。

血清和血漿

使用EDTA，肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑，在標(biāo)準(zhǔn)化血清分離管（SST）或標(biāo)準(zhǔn)化血液采集管中收集靜脈血樣。對于血清樣品，讓樣品在室溫下凝結(jié)30分鐘。根據(jù)試管制造商的使用說明離心分離。立即測定采集的樣品，或等分試樣并保存在-25°C或更低的溫度下。脂血或溶血的樣品可能會產(chǎn)生錯誤的結(jié)果。樣品至少要經(jīng)歷4次凍融循環(huán)。

尿

無菌收集當(dāng)天的一批尿（中游），直接排入無菌容器中。離心除去顆粒物，立即分析或等分并保存在-25°C或更低的溫度下。樣品可以經(jīng)歷至少四個凍融循環(huán)。

試劑準(zhǔn)備

洗滌緩沖液

稀釋的WASHBUF在4°C（2-8°C）下可以穩(wěn)定長達一個月。

股票標(biāo)準(zhǔn)與控制

重構(gòu)的STD和CTRL在室溫（18-26°C）下穩(wěn)定三個小時。STD和CTRL在標(biāo)簽上注明的失效日期之前可穩(wěn)定在-25°C或更低的溫度，并且多可進行三個凍融循環(huán)。

編制標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)備STD7至STD1

樣品制備

將樣品置于室溫并輕輕混合樣品，以確保樣品均勻。我們建議對所有樣品進行重復(fù)測量。

值高于STD7（200 pmol / l）的樣品可用ASYBUF（測定緩沖液）稀釋。

鼠標(biāo)樣本

小鼠血清，血漿和尿液樣品必須用分析緩沖液（ASYBUF）稀釋1 + 7。5 µl樣品+ 35 µl ASYBUF。稀釋后的樣品在4°C（2-8°C）下穩(wěn)定過夜。因此可以在分析前一天制備稀釋液。

大鼠樣本

大鼠樣品未經(jīng)稀釋即使用。

小鼠/大鼠Vanin-1 ELISA測定方案

在開始測定之前，請閱讀整個方案。

計算結(jié)果

使用450 nm波長（參考波長630 nm）在讀板器上讀取所有孔的光密度（OD）。使用能夠生成四參數(shù)對數(shù)（4-PL）擬合的市售軟件從標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度讀數(shù)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線?；蛘?，將標(biāo)樣在x軸上的濃度相對于每種標(biāo)樣在y軸上的平均吸光度作圖，并通過圖中的點繪制擬合曲線。除4-PL以外的曲線擬合算法尚未得到驗證，用戶需要對其進行評估。

從標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品濃度。如果需要，可通過應(yīng)用轉(zhuǎn)換因子將pmol / l轉(zhuǎn)換為pg / ml（1 ng / ml = 18.87 pmol / l； Vanin-1小鼠/大鼠MW：53 kDa）。

計算樣品的終濃度時，必須考慮各自的稀釋系數(shù)。

Vanin-1蛋白

Vanin-1是由513個氨基酸組成的GPI固定糖蛋白，由一個堿基結(jié)構(gòu)域和一個酶促腈水解酶結(jié)構(gòu)域組成（Boersma等，2014）。外切酶催化泛酸水解為泛酸（維生素B5）和胞嘧啶，因此參與氧化應(yīng)激和炎癥的調(diào)節(jié)（Maras等，1999）。Vanin-1具有廣泛的組織表達，在腎小管上皮細胞中觀察到高水平（Pitari等人，2000）.Vanin-1的GPI錨可以通過未知的機制裂解，從而導(dǎo)致Vanin-1被掉進細胞外空間。

Vanin-1功能

Vanin-1是一種上皮細胞外酶，可激活泛素向泛酸（維生素B5）和半胱胺的轉(zhuǎn)化（Pitari等，2000）。已有研究表明Vanin-1釋放的半胱胺可通過抑制超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）等抗氧化劑的活性來促進氧化性組織損傷和炎癥（Hosohata等，2011; Saghaei等，2012 ）。實際上，Vanin-1基因敲除小鼠的GSH儲存量較高，并且對全身伽馬射線輻射引起的氧化損傷具有更高的抵抗力（Berruyer等，2004）。另一方面，一些報告表明Vanin-1也可能充當(dāng)氧化應(yīng)激的組織傳感器。在小鼠中，可以在Vanin-1的啟動子區(qū)域鑒定出類似抗氧化劑反應(yīng)的元素，它們在存在氧化應(yīng)激的情況下增強Vanin-1的表達（Berruyer等，2004）。同樣，在人類近端腎小管細胞系中，暴露于有機溶劑后，Vanin-1的表達也被上調(diào)（Hosohata等，2011）。在大鼠腎臟缺血-再灌注后，還發(fā)現(xiàn)了一個涉及氧化組織損傷的模型，腎臟Vanin-1的表達也被上調(diào)（Yoshida等，2002）。

Vanin-1表達的高水平可能歸因于腎小管上皮細胞，而腎小球中沒有檢測到表達（Hosohata等，2011； Pitari等，2000）。因此，從腎細胞釋放的Vanin-1可以在尿液中檢測到。在一項旨在鑒定腎小管損傷的生物標(biāo)記物的研究中，Hosohata及其同事確實可以在腎毒性藥物誘發(fā)的大鼠模型中證明，Vanin-1在腎小管中的表達要比其他標(biāo)記物早，并掉入尿液中（Hosohata等， 2011）。隨后的研究進一步證實了Vanin-1作為藥物引起的急性腎損傷（Hosohata等，2012，2016a），阻塞性腎病（Washino等，2019）和腎積水（Hosohata）的早期腎小管損傷的生物標(biāo)志物的有效性。等（2018），糖尿病腎?。‵ugmann等，2011），高鹽攝入下實驗性結(jié)腸炎（Hosohata等，2014）和自發(fā)性高血壓大鼠的腎臟損傷（Hosohata等，2016b; Washino等，2018）。值得注意的是，Vanin-1似乎比已建立的標(biāo)志物KIM-1，NGAL或NAG具有更好的預(yù)測急性腎損傷的價值（Fugmann等，2011； Hosohata，2016； Hosohata等，2011）。

• 腎臟科

  • 急性腎損傷（Hosohata等，2016a）
  • 糖尿病腎?。‵ugmann et al。，2011）
  • 藥物引起的急性腎損傷（Hosohata等，2016a）
  • 腎積水（Hosohata等，2018），阻塞性腎病（Washino等，2019）

文學(xué)

• Vanin-1-/-小鼠表現(xiàn)出谷胱甘肽介導(dǎo)的組織對氧化應(yīng)激的抗性。

  Berruyer，C.，Martin，F(xiàn)M，Castellano，R.，Macone，A.，Malergue，F(xiàn).，Garrido-Urbani，S.，Millet，V.，Imbert，J.，Duprè，S.，Pitari，G. ，Naquet，P.，Galland，F(xiàn).，2004 。細胞。生物學(xué) 24，7214–7224。

  PMID：15282320; PMCID：PMC479710

• Vanin 1的結(jié)構(gòu)：連接代謝疾病和炎癥的關(guān)鍵酶。

  Boersma，YL，Newman，J.，Adams，TE，Cowieson，N.，Krippner，G.，Bozaoglu，K.，Peat，TS，2014。ActaCrystallogr 。D生物學(xué)。Crystallogr。70，3320–3329。

  PMID：25478849

• 在1型糖尿病腎病大鼠模型中，vanin-1的蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定為腎臟損傷的標(biāo)志物。

  Fugmann，T.，Borgia，B.，Révész，C.，Godó，M.，F(xiàn)orsblom，C.，Hamar，P.，Holthöfer，H.，Neri，D.，Roesli，C.，2011.腎臟。80，272–281。

  PMID：21544065

• 腎盂尿液中的Vanin-1反映了腎積水大鼠模型的腎臟損傷。

  Hosohata，K.，Jin，D.，Takai，S.，Iwanaga，K.，2018.分子科學(xué)19。

  PMID：30332759; PMCID：PMC6214032

• 氧化應(yīng)激在藥物誘發(fā)的腎損傷中的作用。

  Hosohata，K.，2016年。分子科學(xué)17。

  PMID：27809280; PMCID：PMC5133827

• 尿vanin-1對尿路上皮癌患者順鉑誘導(dǎo)的腎毒性的早期預(yù)測。

  Hosohata，K.，Washino，S.，Kubo，T.，Natsui，S.，F(xiàn)ujisaki，A.，Kurokawa，S.，Ando，H.Fujimura，A.，Morita，T.，2016a。毒理學(xué)359–360，71–75。

  PMID：27317936

• 高鹽攝入量的自發(fā)性高血壓大鼠小管損傷的早期尿液生物標(biāo)志物。

  Hosohata，K.，Yoshioka，D.，Tanaka，A.，Ando，H.，F(xiàn)ujimura，A.，2016年b。高血壓。Res。39，19–26。

  PMID：26376947

• 實驗性結(jié)腸炎大鼠中使用尿vanin-1早期發(fā)現(xiàn)腎臟損傷。

  Hosohata，K.，Ando，H.，F(xiàn)ujimura，A.，2014?！?em>應(yīng)用毒理學(xué)雜志》 34，184–190 。

  PMID：23307618

• 尿Vanin-1作為藥物誘導(dǎo)的急性腎損傷的早期檢測的新型生物標(biāo)志物。

  Hosohata，K.，Ando，H.，F(xiàn)ujimura，A.，2012年。《藥理學(xué)與實驗治療學(xué)雜志》 341，656–662。

• Vanin-1：腎毒性劑引起的腎損傷的潛在生物標(biāo)志物。

  Hosohata，K.，Ando，H.，藤原，Y。，藤村，A.，2011。毒理學(xué)290，82–88。

  PMID：21907259

• Pantetheinase是小鼠和人類vanin-1蛋白的真實身份嗎？

  Maras，B.，Barra，D.，Duprè，S.，Pitari，G. ，1999。FEBS來信461，149-152。

• 膜結(jié)合Vanin-1的Pantetheinase活性：Vanin-1缺陷小鼠組織中缺乏游離半胱胺。

  Pitari，G.，Malergue，F(xiàn).，Martin，F(xiàn).，Philippe，JM，Massucci，MT，Chabret，C.，Maras，B.，Duprè，S.，Naquet，P.，Galland，F(xiàn).，2000。FEBS信函483，149–154。

• 卡托普利對半胱胺誘導(dǎo)的十二指腸潰瘍的影響。

  Saghaei，F(xiàn).，Karimi，I.，Jouyban，A.，Samini，M.，2012。實驗。Pathol。64，373–377。

  PMID：21036019

• Vanin-1，急性腎損傷的新型生物標(biāo)志物，用于阻塞性腎?。阂豁椙罢靶躁犃醒芯?。

  華盛頓州北區(qū)野市，細田ata市，大島縣，小河內(nèi)市，小西區(qū)，中村市，佐藤市，宮川市，2019年。分子科學(xué)20。

  PMID：30791405; PMCID：PMC6412925

• 正常血壓大鼠高鹽攝入量引起的腎小管損害的早期尿液生物標(biāo)志物。

  Washino，S.，Hosohata，K.，Jin，D.，Takai，S.，Miyagawa，T.，2018.臨床。經(jīng)驗 Pharmacol。生理學(xué)。45，261–268。

  PMID：29027259

• 監(jiān)測大鼠腎臟缺血再灌注中基因表達的變化。

  吉田T.，庫雷拉M.，比托F.，Min H.，Ingelfinger，JR，Stears，RL，Swinford，RD，Gullans，SR，Tang，S.-S.，2002年。61，1646–1654.。

  PMID：11967014