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更新時間：2016-02-16
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Worthington組織消化指南
引言
組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細胞生物學(xué)研究的原代細胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年，但是對其組織消化和細胞收集的作用機制卻沒有全面的理解。 由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機選擇或基于過去的經(jīng)驗，而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案，以及如何根據(jù)具體實驗?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實驗結(jié)果。
細胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細胞，而影響結(jié)果的原因有很多，包括（不限于）以下：
1、組織類型
2、物種來源
3、動物年齡
4、遺傳改造情況（如knockouts）
5、所用的消化培養(yǎng)液
6、所用的酶
7、消化酶中的雜質(zhì)
8、所用消化酶的工作濃度
9、溫度
10、孵育時間
通常前四個原因沒辦法選擇，而剩下的原因一般由經(jīng)驗決定以獲取zui適實驗結(jié)果。
通過查閱文獻來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實驗數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動態(tài)的特性，以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。
本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細胞收集知識和方法，描述了標準的實驗步驟， 以便于制定一個*的細胞分離方案，同時列舉了一些相關(guān)的參考文獻。
下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻，以組織類型和物種分類，詳見鏈接）
脂肪組織 | 腎上腺組織 | 骨組織 | 腦組織 |
軟骨組織 | 結(jié)腸組織 | 內(nèi)皮組織 | 上皮組織 |
眼 | 心臟 | 腸 | 腎 |
肝 | 肺 | 淋巴結(jié) | 乳腺 |
其它組織 | 其他組織 | 肌組織 | 神經(jīng)組織 |
胰腺 | 腮腺 | 垂體 | 前列腺 |
生殖 | 動物鱗片 | 皮膚 | 脾臟 |
干細胞 | 胸腺 | 甲狀腺/甲狀旁腺 | 扁桃體 |
腫瘤 |
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|
注：使用Worthington公司消化酶的文獻不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。
腮腺組織消化手冊
| 物種 | 詳細來源 | 細胞名稱 | 消化用酶 | 培養(yǎng)基 | 參考文獻 |
| 小鼠 | 小鼠 | Parotid and sublingual glandular | Neutral Protease: 50 u/ml | PBS | Ogawa, M., Oshima, M., Imamura, A., Sekine, Y., Ishida, K., Yamashita, K., Nakajima, K., Hirayama, M., Tachikawa, T. and Tsuji, T.: Functional Salivary Gland Regeneration by Transplantation of a Bioengineered Organ Germ., Nat Commun 4, 2498, 2013 |
| Collagenase Type 1: 100 u/ml | |||||
| 大鼠 | Wistar大鼠, 雄性, 130 克 | Acinar | Collagenase: 75 u/ml | RPMI 1640 | Looms, D., Dissing, S., Tritsaris, K., Pedersen, A. and Nauntofte, B.: Adrenoceptor-Activated Nitric Oxide Synthesis in Salivary Acinar Cells., Adv Dent Res 14, 62, 2000 |
| Hyaluronidase: 153 u/ml | |||||
| 大鼠 | SD大鼠, 100-120 克 | Parotid acinar cells | Collagenase Type 2: 90 u/ml | Krebs-Henseleit Bicarbonate | D'Silva NJ, DiJulio DH, Belton CM, Jacobson KL, Watson EL: Immunolocalization of Rap1 in the rat parotid gland: detection on secretory granule membranes, J Histochem Cytochem 45, 965-73, 1997 |
| 大鼠 | SD大鼠, 雄性 | Epithelial | Collagenase: 50-75 u/ml | HBSS CF | Prasad, K.N., Edwards-Prasad, J., Carvaiho, I., LaRosa, F.G., Baibinder, E., Meyers, A., and Quissell, D.: Establishment of Primary Cultures of Rat and Human Parotid Epithelial Cells for Transfection Experiments, In Vitro Cell Dev Biol 28, 493, 1992 |
| Hyaluronidase: 0.1% | |||||
| 大鼠 | SD大鼠, 雄性, 100-150 克 | Parotid acinar | Trypsin: 0.001% | F12 medium | Yeh, C., Mertz, P., Oliver, C., Baum, B., and Kousvelari, E.: Cellular Characteristics of Long-Term Cultured Rat Parotid Acinar Cells, In Vitro Cell Dev Biol 27, 707, 1991 |
| 大鼠 | Wistar大鼠, 雄性 | Parotid acinar | Trypsin: 0.02% | Solution B | Foskett, J., Roifman, C. and Wong, D.: Activation of Calcium Oscillations by Thapsigargin in Parotid Acinar Cells, J Biol Chem 266, 2778, 1991 |
| (See reference) | |||||
| 大鼠 | 大鼠 | Parotid | Hyaluronidase: 0.025% | HBSS with 20mM HEPES | Takuma, T. and Ichida, T.: Amylase Secretion From Saponin-Permeabilized Parotid Cells Evoked by Cyclic AMP, J Invest Dermatol 103, 95, 1988 |
| 大鼠 | Wistar大鼠, 雄性, 250 - 350 克 | Acinar, parotid | Hyaluronidase: 0.015% | Earle's MEM | Melvin, J., Kawaguchi, M., Baum, B., and Turner, R.: A Muscarinic Agonist-Stimulated Chloride Efflux Pathway is Associated With Fluid Secretion in Rat Parotid Acinar Cells, Biochem Biophys Res Commun 145, 754, 1987 |
| 大鼠 | SD大鼠, 雄性, 50 - 125 克 | Acinar | Trypsin: 0.01% | HBSS, CMF | Oliver, C., Waters, J., Tolbert, C., and Kleinman, H.: Growth of Exocrine Acinar Cells on a Reconstituted Basement Membrane Gel, In Vitro Cell Dev Biol 23, 465, 1987 |
| Exorbital lacrimal, parotid, pancreas | |||||
| 大鼠 | SD大鼠, 白化變種, 雄性, 150-200 克 | Acinar, parotid | Trypsin: 0.01% | HBSS CMF | Mangos, J., McSherry, N., Butcher, F., Irwin, K., and Barber, T.: Dispersed Rat Parotid Acinar Cells (Morphological, Functional Character), Am J Physiol 229 (3), 560, 1975 |
| Collagenase: 40-50 u/ml | |||||
| Hyaluronidase: 0.10% |
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